文獻速遞 | HPSEC-MALLS鑒定PCV2滅活疫苗及VLP疫苗抗原
病毒樣顆粒（Virus like particles，VLPs），由于具有安全性高，在結構上與病毒粒子相似，可通過與病毒粒子相同的途徑激起免疫系統的有效應答等優(yōu)點，近二十年來在人用、獸用疫苗及藥物遞送系統中的應用越來越受到關注。
賽分科技客戶中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中科院過程所在《生物工程學報》雜志發(fā)表文章，文中采用賽分科技體積排阻色譜SRT SEC-500建立病毒樣顆粒疫苗及豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗的檢測方法，并進行方法學驗證。
背景介紹
疫苗中抗原含量直接影響疫苗的免疫效果。滅活病毒疫苗及VLP 疫苗中的抗原通常具有復雜的顆粒結構。常用的酶聯免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)等方法往往難以區(qū)分不同顆粒結構的抗原。通過高效體積排阻色譜(high-performance size-exclusion chromatography，HPSEC)和多角度激光散射儀(multi-angle laser light scattering, MALLS)聯用可以獲取生物樣品中的顆粒直徑分布、分子質量及分布、顆粒的聚集情況等信息，是對現有的動物實驗法和ELISA 方法有力的技術補充。該方法高效便捷、重復性好等優(yōu)點，已在口蹄疫疫苗的質控中被廣泛應用。
豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus, PCV2) 是圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬成員，是迄今發(fā)現的脊椎動物最小的DNA病毒之一。經研究證明PCV2 能引發(fā)多種癥狀，如斷奶仔豬多系統衰竭綜合征、豬皮炎和腎病綜合征、豬呼吸道疾病綜合征等，導致豬群出現大批量死亡，對畜牧業(yè)經濟造成了嚴重威脅，疫苗是最為有效防治PCV的措施，對于克制病毒至關重要。現今，PCV2 疫苗產品沒有統一的效力評價和相應種類抗原含量的評價方法，因而開發(fā)出疫苗檢測的準確、通用的方法對于評價現有的疫苗產品質量具有重要意義。
文章概述
文章采用賽分科技體積排阻色譜柱SRT SEC-500建立HPSEC-MALLS檢測豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）疫苗抗原檢測方法。以純化的PCV2滅活病毒及VLP為參照，對4家生產企業(yè)的2種PCV2滅活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后進行HPSEC-MALLS檢測及分子量分析；結合PCV2 抗原檢測卡、Western blotting 和透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)，鑒定了特征色譜峰；考察了方法的重復性和檢測線性。經初步驗證，該方法有望成為一種準確、高效的PCV2疫苗的體外評價方法，用于質量評價與提升。
HPSEC-MALLS檢測
樣品：采用上述色譜條件對破乳后的水相抗原進行檢測。
流動相：50 mmol/L pH 7.4 磷酸緩沖液，含0.1 mmol/L 硫酸鈉；
進樣體積：100 μL；
流速：0.6 mL/min；
檢測器：UV檢測波長280 nm，MALLS檢測器（λ=690 nm），示差檢測器（RID）依次串聯；
數據處理：樣品相對分子量通過ASTRA 軟件(Wyatt Technology, USA)計算獲得。
圖1 HPSEC-MALLS 檢測色譜圖
(A)PCV2 滅活病毒參照品 (B)CAP VLP 抗原參照品
圖2 HPSEC-MALLS檢測PCV2滅活疫苗及VLP 疫苗破乳后的水相抗原分子量分布與色譜圖
(A)疫苗a. (B) 疫苗b. (C) 疫苗c. (D) 疫苗d.
圖3 HPSEC 檢測(A)疫苗d 及(B)Cap VLP 抗原參照品三次重復性檢測的色譜圖
圖4 Cap VLP 純化抗原中VLP及多聚體的HPSEC檢測的峰面積與蛋白濃度的線性相關性
(A) CapVLP 抗原參照品梯度稀釋色譜圖。
(B) VLP 及VLP 聚集體的HPSEC 檢測峰面積與抗原蛋白濃度的線性回歸曲線
結論
文章采用賽分科技SRT SEC-500體積排阻色譜柱建立病毒樣顆粒疫苗及PCV2 型滅活疫苗的檢測方法。通過HPSEC 可實現快速定量分析PCV2 病毒樣顆粒疫苗中的組裝體及其聚集體組成，并且方法學驗證表明該方法具有很好的重復性和檢測線性，有望成為一種準確、高效的PCV2 疫苗的體外評價方法，作為現有方法的補充，在疫苗的質量監(jiān)管及提升中發(fā)揮作用。
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[1] 徐嫄，楊延麗，鄒興啟，等．應用高效體積排阻色譜偶聯多角度激光散射鑒定豬圓環(huán)病毒2 型滅活疫苗及病毒樣顆粒疫苗抗原[J/OL]．生物工程學報. https://doi.org/10.13345/j.cjb. 210937
